کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) یک تکنیک همه کاره و پرکاربرد در شیمی تجزیه است که جداسازی و آنالیز دقیق مخلوط های پیچیده را ارائه می دهد. محور موفقیت هر آنالیز HPLC، انتخاب ستون مناسب برای آنالیز خاص شما است. برای کاربران HPLC، انتخاب ستون مناسب مانند انتخاب کلید مناسب برای باز کردن قفل آنالیزهای دقیق و کارآمد است. بنابراین، انتخاب ستون مناسب از اهمیت بالایی برخوردار است.
با مجموعه گسترده ای از گزینه ها، چگونه گزینه بهینه را انتخاب می کنید؟
در اینجا یک راهنمای سریع برای بررسی برخی از عوامل مهم در انتخاب ستون آورده شده است:
1- شیمی فاز ساکن
فاز ساکن ستون، نقش قلب جداسازی را ایفا می کند. فاز ساکن یک ستون HPLC، خواص گزینش پذیری و بازداری ستون را تعیین می کند.
گزینه های رایج فاز ساکن عبارتند از فاز معکوس (C18 برای آنالیت های غیر قطبی)، فاز نرمال (سیلیکا برای آنالیت های قطبی)، تبادل یونی (برای مولکول های دارای بار)، و اندازه طردی. فاز ثابتی را انتخاب کنید که به بهترین وجه با خواص شیمیایی آنالیت ها و مکانیسم جداسازی مورد نیاز برای آنالیز شما مطابقت دارد.
۲. اندازه ذرات و اندازه منافذ
اندازه ذرات و اندازه منافذ به طور قابل توجهی بر کارایی و رزلوشن یک ستون HPLC تأثیر می گذارد. ذرات کوچکتر (1.8 میکرومتر) پیک های های شارپ تر اما فشار برگشتی بالاتری را ارائه می دهند. ذرات بزرگتر (5 میکرومتر) برای آنالیزهای روتین مناسب هستند. اندازه منافذ باید متناسب با آنالیت های شما باشد، از منافذ بزرگتر برای مولکولهای بزرگتر استفاده کنید.
3- ابعاد ستون
ابعاد ستون، مانند طول و قطر، بر رزلوشن، ظرفیت و زمان آنالیز سیستم HPLC موثر است. ستونهای بلندتر رزلوشن را افزایش می دهند اما ممکن است زمان آنالیز را افزایش دهند، در حالیکه ستونهای با قطر بیشتر ظرفیت بارگذاری نمونه را افزایش می دهند اما ممکن است رزلوشن را کاهش دهند. ابعاد ستون را بر اساس الزامات آنالیز خود انتخاب کنید و بین رزلوشن و زمان آنالیز تعادل برقرار کنید.
4- سازگاری (Compatibility)
از سازگاری بین مواد پرکننده ستون و اجزای فاز متحرک برای جلوگیری از فعل و انفعالاتی که می تواند بر عملکرد کروماتوگرافی تأثیر بگذارد، اطمینان حاصل کنید. برای حفظ یکپارچگی ستون و افزایش طول عمر آن، pH، ترکیب حلال و پایداری دمایی فاز ساکن و متحرک را در نظر بگیرید.
5. ماتریس نمونه و خواص آنالیت ها
هنگام انتخاب ستون HPLC، ماهیت ماتریس نمونه و خواص فیزیکوشیمیایی آنالیت های خود را در نظر بگیرید. عواملی مانند قطبیت، آبگریزی، اسیدیته/بازی بودن و وزن مولکولی بر انتخاب فاز ساکن و شرایط جداسازی تأثیر میگذارند. تداخل ها را در نظر بگیرید، ممکن است یک ستون تخصصی برای ماتریس های پیچیده مورد نیاز باشد.
6- ستونهای برای کاربردهای خاص
برای برخی از آنالیزها نیاز به ستون های تخصصی متناسب با ماهیت آنالیت ها داریم. برای مثال، ستونهای کایرال برای جداسازی انانتیومرها، ستونهای افینیتی برای جداسازی بیومولکول ها و ستونهای برهمکنش ترکیبی (mixed-mode) برای نمونه های با ماتریس پیچیده مورد نیاز هستند.
7- کیفیت و اعتبار برند
مارک های معتبر را انتخاب کنید که به دلیل کیفیت ثابت و پشتیبانی فنی شناخته شده اند و همواره مد نظر داشته باشید که انتخاب ستون HPLC مناسب برای دستیابی به نتایج کروماتوگرافی دقیق و قابل اعتماد ضروری است.